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信帆生物:引物合成文獻上線

更新時間:2025-02-25      瀏覽次數:54

信帆生物:引物合成文獻上線

《 LncRNA PSMA3-AS1調節miR-186-5p/SOX4軸對神經母細胞瘤細胞增殖、遷移和侵襲的影響》

摘要: 目的 探索長鏈非編碼RNA人蛋白酶體α亞基3型的反義RNA1(long non?coding RNA PSMA3?AS1,lncRNA PSMA3?AS1)對神經母細胞瘤細胞增殖、遷移和侵襲的影響以及對微小RNA?186?5p(microRNA?186?5p,miR?186?5p)/性別決定區Y框蛋白4(sex determining region Y box protein 4,SOX4)軸的調控機制。方法 利用LipofectamineTM 3000試劑將si?PSMA3?AS1及其陰性對照、miR?186?5p inhibitor及其陰性對照分別轉染至人神經母細胞瘤細胞SH?SY5Y中,隨機分為Control組(未轉染質粒)、si?NC組(轉染si?PSMA3?AS1陰性對照)、si?PSMA3?AS1組(轉染si?PSMA3?AS1)、si?PSMA3?AS1+miR?NC組(共轉染si?PSMA3?AS1和miR?186?5p inhibitor陰性對照)、si?PSMA3?AS1+miR?186?5p inhibitor組(共轉染si?PSMA3?AS1和miR?186?5p inhibitor)。采用qRT?PCR法檢測各組細胞中PSMA3?AS1、miR?186?5p和SOX4 mRNA的表達水平;Western blot檢測各組轉染細胞中SOX4蛋白的表達水平。采用CCK?8法、Transwell實驗檢測各組轉染細胞的增殖、遷移及侵襲能力。采用生物信息學方法預測和雙熒光素酶報告基因實驗驗證miR?186?5p與PSMA3?AS1和SOX4之間的靶向關系。結果 相較于Control組和si?NC組,si?PSMA3?AS1組細胞中的PSMA3?AS1表達水平、細胞存活率、遷移及侵襲細胞數均降低(均P<0.001)。雙熒光素酶報告基因實驗結果顯示,PSMA3?AS1能靶向負調控miR?186?5p,而miR?186?5p能靶向負調控SOX4。敲低PSMA3?AS1后細胞的miR?186?5p表達水平升高,而SOX4 mRNA和蛋白表達水平均降低(均P<0.001)。回補實驗發現,相較于si?PSMA3?AS1+miR?NC組,si?PSMA3?AS1+miR?186?5p inhibitor組SOX4 mRNA及蛋白表達水平、細胞存活率、遷移及侵襲細胞數均升高(均P<0.001),而miR?186?5p表達水平降低(P<0.001)。結論 敲低PSMA3?AS1可能通過調節miR?186?5p/SOX4軸抑制神經母細胞瘤細胞的增殖、遷移及侵襲行為。

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